【摘 要】 目的：探讨rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细 胞ALPase活性的影响。方法：采用酶动力学的方法，比较不同浓 度rhBMP2和rhTGF-β1单独或联合应用对人牙髓细胞的ALPase活性的影响。结果 ：rhBMP2对人牙髓细胞的ALPase活性呈浓度依赖性增强，rhTGF-β1对人牙髓细 胞ALPase活性的影响与其本身浓度有关 。当rhTGF-β1浓度为1μg/L与rhBMP2联合应用时， ALPa se活性比rhBMP2单独应用明显增高。结论：rhBMP2、rhTGF-β1单独 及联合应用于人牙髓细胞时，对人牙髓细胞的ALPase活性作用不同，其对人牙髓细胞的生理 功能可能有调节作用。
【关键词】 人牙髓细胞；rhBMP2；rhTGF-β1；ALPase
碱性磷酸酶（ALPase）被认为与体内硬组织的形成有关，是研究成骨 细胞功能和分化的一个重要参考指标［1］。众多研究表明，体外培养的牙髓细胞不 同于一般的成纤维细胞，具有许多与成骨细胞相似的特征，如高碱性磷酸酶活性、钙化现象 、对钙调节因子和激素的特殊反应性等［2］。已发现rhBMP2和rhTGF-β1单独使用 对人牙髓细胞的ALPase具有调节作用［3,4］。其两者联合应用对人牙髓细胞的ALPa se活性水平如何?目前资料尚少。本研究旨在观察rhBMP2与rhTGF-β1联合 应用对体外培养的人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响。
1 材料和方法
1.1 主要试剂和仪器
碱性磷酸酶测定试剂盒（台湾BGH）、1g/L TritonX-100（华美生物工程公司）、酶联免疫 检测 仪（华东电子管厂）、rhBMP2（中国军事医学科学院）、rhTGF-β1（四医大西京医院骨科 ）。
1.2 方法
选择生长良好的第5代人牙髓细胞以浓度3×107/L接种96孔培养板，每孔100μl，培养液 为100ml/L FCS的DMEM培养液，在37℃、50ml/L CO2孵箱中培育24h，弃孔内液体和未贴壁 细胞，无血清培养液洗3遍，实验组换20ml/L FCS的DMEM培养液，稀释不同浓度的rhBMP2 （μg/L）：50、100、200；rhTGF-β1（μg/L）：0.1、1、10；rhTGF-β1+rhBMP2 （ μg/L）：1+50、1+100、1+200的生长因子加入孔内，阴性对照只加入10ml/L FCS的培养 液，每组4孔，各100μl，继续培养48h后弃除各孔培养液，用pH7.4的PBS洗3遍，吸干，每 孔加入1g/L的TritonX-100 50μl，置4℃冰箱过夜，然后加入ALP底物，每孔100μl，37℃ 孵箱内置30min，以每孔加入0.2mol/L NaOH 50μl 终止反应，在酶联免疫检测仪 上选择410nm波长测各孔A值，各浓度组取平均值，采用t检验进行统计学分析。
2 结果 (表1)
表1 不同程度rhBMP2 与rhTGF-β1 单独及联合应用对人牙髓细胞ALPase的影响
分组 | 剂量（μg/L） | A值 | t值 |
对照组 | 0 0 | 0.25±0.04 |
|
rhBMP2 | 50 — | 0.38±0.02 * | 5.90 |
| 100 — | 0.42±0.05 * | 5.31 |
| 200 — | 0.51±0.07 * | 6.45 |
rhTGF-β1 | — 0.1 | 0.30±0.05 | 1.56 |
| — 1 | 0.37±0.03 * | 4.80 |
| — 10 | 0.27±0.04 | 0.71 |
联合组 | 50+ 1 | 0.43±0.03 * | 7.20 |
| 100+1 | 0.56±0.07 * | 7.75 |
| 200+1 | 0.68±0.06 * | 11.94 |
* P<0.05
单独使用rhBMP2 时，各浓度组均可刺激人牙髓细胞的ALPase活性（P<0.05 ） ，并呈浓度依赖性。
单独使用rhTGF-β1，在浓度为1μg/L时，可刺激人牙髓细胞的ALPase活性（P<0.05） 。其余各浓度组对ALPase无明显作用(P>0.05)。1μg/L组与10μg/L组对ALPase作用 有显著差异(P<0.05)。
rhBMP2与rhTGF-β1联合应用时，各浓度组均可刺激人牙髓细胞的ALPase活性（P<0.05 ）。并与相应单独使用rhBMP2 的各浓度组相比ALPase活性有所增强（P<0.05 ）。
