［摘要］ 目的：体外观察酪蛋白磷酸多肽(casein phospho peptides， CPP)对主要致龋菌变形链球菌、远缘链球菌的直接作用。方法：将细菌活化，并接种于培养基内，通过琼脂糖扩散培养及纸片法，观察细菌生长和各组的抑菌程度。结果： CPP对变形链球菌和远缘链球菌无直接抑菌作用。结论： CPP如作为生物防龋制剂用于临床，尚需添加其他无毒有效的抑菌剂，以提高其防龋效能。
［关键词］ 酪蛋白磷酸多肽(CPP)； 变形链球菌； 远缘链球菌6715； 防龋
婴幼儿及学龄前儿童是一组特殊人群，其自我保护意识差，刷牙后易误吞，故氟化物类防龋牙膏、漱口水在该组人群的使用，其安全性令人担忧。因而寻找适合婴幼儿及学龄前儿童的生物防龋剂则尤显重要。酪蛋白磷酸多肽(casein phospho peptides， CPP)为一种酪蛋白水解产物，有文献报道其可减少动物患龋率，降低变形链球菌的粘附能力［1］。本研究拟通过体外细菌培养，观察 CPP对变形链球菌、远缘链球菌的直接作用。
材料与方法
一、材料
变形链球菌(S.mutans Ingbritt)本院龋病研究室冻存标准菌。远缘链球菌(S.sobrinus 6715)本院龋病研究室冻存标准菌。 酪蛋白磷酸多肽 casein Phospho peptide CE90(简称 CPP)(戴维林贸易公司提供).氟化钠,普鲁卡因青霉素。
二、实验分组
1. 琼脂糖扩散法分组 对照组： TSB培养基；含氟组： TSB培养基内含 500×10-6氟化钠；实验组： TSB培养基内含 2％ CPP；
2. 纸片法分组 对照组：蒸馏水；抗菌素组：普鲁卡因青霉素；实验组： 80％CPP
三、方法
1. 将-20℃甘油保存的菌种S.mutans Ingbritt及S.sobrinus 6715，接种于 TSB 培养基，37℃微需氧活化培养48h，以后两种细菌分别在 MS平板上划线接种，37℃微需氧培养48h。分别挑取两种菌株单菌落至 TSB培养基中，37℃微需氧培养18h后取出。3000r/min离心15min，搜集菌体。用 PBS缓冲液洗涤菌体 3次，再用 PBS调细菌 ABS为0.5即制成菌悬液，备用。
2. 琼脂糖扩散培养。分别蘸取 ABS为0.5的两种菌悬液50μl，并分别接种于各组 TSB 培养平板内，37℃微需氧培养48h，观察细菌生长并记录。生长程度分为三级，即：阴性(-)：无细菌生长；弱阳性(+)：有细菌生长，菌落较稀疏；阳性(++):细菌生长，菌落浓密。
3. 纸片法：将上述两种菌悬液涂布至 TSB平板，然后分别将浸有蒸馏水、普鲁卡因青霉素以及 80％CPP的6μm滤膜放置其内，微需氧培养24h，观察抑菌环直径。
结 果
1. 琼脂糖扩散培养。实验表现为：对照组两种细菌生长繁密，CPP也有细菌生长，而含氟组两种细菌均未见生长(表1)。
表1 各组细菌生长比较
| 菌种 | 组别 | ||
| 对照组 | CPP | 含氟组 | |
| S.mutans Ingbritt | ++ | + | - |
| S.sobrinus 6715 | ++ | + | - |
2. 纸片法：对照组及 CPP组的纸片外周对S.mutans Ingbritt及S.sobrinus 6715 两种细菌均未见抑菌环，抗菌素组则分别见 2cm 及1.5cm抑菌环。
讨 论
氟化物长期以来是防龋的主要制剂，除了对牙齿硬组织作用外，还可进入主要致龋菌变形链球菌的胞内，抑制胞内部分酶的活性，导致其产酸减少，并通过影响细菌胞壁大分子物质，如脂磷壁酸而影响细菌胞壁的稳定性。然而氟化物广泛、长期、持久地使用，不仅致使婴幼儿氟中毒以及产生氟斑牙，同时还可诱使耐氟菌株的产生，后者在产酸、耐酸、脱矿等致龋性在多数情况下大于亲代野生株，因此寻找生物防龋制剂势在必行。
现已证明酪蛋白磷酸多肽 CPP可促进钙在体内的吸收，因而被用于儿童及绝经后的妇女［2］。不仅如此，国内外尚有研究报告认为 CPP通过调节牙釉质的矿化而具有防龋作用［3，4］。
本研究通过琼脂糖扩散培养及纸片法，体外观察了 CPP对主要致龋菌变形链球菌和远缘
链球菌的抑菌作用，结果为其无直接抑菌作用，故我们认为：1) CPP在动物体内能明显地减低患龋率，与其携带钙、磷成分并与羟磷灰石有较强亲和力，使牙齿再矿化过程加强［4］以及通过渗入唾液小泡，并随唾液被覆在牙的羟磷灰石表面，降低变形链球菌的粘附［1］有关， CPP并无直接抑菌作用，该结果与 Reynolcy等［3］的结论： CPP在口腔菌斑内不能降低远缘链球菌和总链球菌数的结果一致。2) 氟化物表现为强抑菌性， CPP生物防龋制剂尚不能在抑菌强度方面替代它。
