〔摘要〕　目的：探讨转化生长因子β受体在人牙髓中的表达和牙髓细胞对TGF-β作用的反应机理。方法：用免疫组化方法检测转化生长因子βⅠ型受体(TβR-I)和Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)在健康及龋坏人牙髓中的表达。结果：转化生长因子-βⅠ型受体和Ⅱ型受体在成牙本质细胞层强阳性表达，其中Ⅰ型受体较Ⅱ型受体表达量多，两种受体在成牙本质细胞层下方的富细胞区及中心部牙髓有表达或弱表达，龋坏牙髓与正常牙髓有相同的反应模式。结论：转化生长因子-βⅠ型和Ⅱ型受体在健康及龋坏人牙成牙本质细胞及牙髓其它细胞皆有表达，提示成牙本质细胞及牙髓其它细胞在牙髓损伤修复过程中具有重要作用。
关键词　转化生长因子-β受体；牙髓；免疫组织化学

　　转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)是一族具有多种生物学功能的细胞因子，对许多器官和组织的生长和分化起着重要作用，能刺激或抑制多种细胞的增殖，在创伤愈合、胚胎发育、细胞外基质形成、骨的重建、免疫调节以及神经系统的发育等过程中发挥重要作用。TGF-β参与牙髓损伤修复过程逐渐得到人们的关注，国内外已有TGF-β直接盖髓成功的报道〔1、2〕。有关TGF-β参与损伤修复的机理研究较少。本实验的目的是探讨TGF-β受体在健康及龋坏人牙髓中的表达和TGF-β参与牙髓损伤修复的作用机理。

1　材料与方法
1.1　标本制备
　　收集口腔颌面外科门诊患者因治疗需要拔除的健康第三磨牙10个，龋坏牙根据龋坏程度分为三度，I度为牙釉质龋，Ⅱ度为牙本质浅龋，Ⅲ度为牙本质深龋尚未露髓(包括牙颈部龋)各10个，患者年龄在20～40岁之间，牙齿拔除后立即穿通髓角。用40 g/L多聚甲醛4 ℃固定24 h，制备2 mm厚牙齿磨片，继续固定24 h。甲酸甲酸钠脱钙液4 ℃下脱钙两周左右，常规脱水，石蜡包埋，制备5 μm厚连续切片。
1.2　主要试剂
　　TGF-βⅠ型和Ⅱ型受体多克隆抗体(博士德公司)，SP试剂盒(美国Zymed公司)，DAB试剂盒(中山公司)
1.3　免疫组化染色
　　采用SP法，切片脱蜡至水，体积分数为0.3%过氧化氢液室温下孵育10 min以消除内源性过氧化物酶，1 g/L胰蛋白酶消化15 min，正常羊血清孵育30 min，滴加一抗(工作液)，4 ℃湿盒过夜，37 ℃复温1 h，滴加生物素化二抗(1∶100)37 ℃孵育30 min，酶结合物(1∶100) 37 ℃孵育30 min，DAB显微镜下控制显色。上述各步之后均用0.01 mol/L PBS振洗3次，每次5 min。阳性对照，乳腺癌组织。阴性对照用PBS代替一抗，常规脱水，二甲苯透明，封片。

2　结　果
　　TGF-β I型和Ⅱ型受体的染色阳性部位在细胞膜和细胞浆，深棕色为强阳性，棕色为阳性，浅黄色为弱阳性。健康人恒牙TGF-β I型受体在成牙本质细胞层呈强阳性表达(图1)，在成牙本质细胞层下方的富细胞区呈阳性 (图2)，牙髓中间部细胞为弱阳性 (图3)，TGF-β Ⅱ型受体与I型受体染色相同，表达较弱(图4)。牙釉质龋和牙本质浅龋TGF-β I型受体和Ⅱ型受体表达与健康人恒牙染色结果一致(图5)，牙本质深龋下方的成牙本质细胞大多破坏，周围残留的成牙本质细胞和牙髓细胞染色也与正常人牙相同。

图1　TGF-β I型受体在健康人牙髓成牙本质
细胞呈强阳性 40×

图2　TGF-β I型受体在健康人牙髓富细胞区呈阳性 40×

图3　TGF-β I型受体在健康人牙髓中间部细胞为弱阳性 40×

图4　TGF-βⅡ型受体在健康人牙髓成牙本质细胞呈强阳性，其下方的牙髓细胞呈弱阳性 40×

图5　TGF-βⅡ型受体在牙本质浅龋中的成牙本质细胞呈强阳性 40×

3　讨　论
　　转化生长因子-β超家族成员包括5种TGF-β(β 1～β 5)和其它类似物，在哺乳动物中主要包括TGF-β 1～β 3。TGF-βs在牙髓损伤修复过程中具有重要作用。Cassidy等〔3〕报道在人牙本质中的EDTA和胶原酶溶解液中含有TGF-β 1，提示牙本质基质中含有TGF-β 1，牙体损伤后(如龋坏、酸蚀、磨损等)可以释放出来作用于成牙本质细胞，参与反应性牙本质形成。Tziafas〔1〕用浸有TGF-β 1的微孔滤膜置于暴露的狗磨牙牙髓42 d后发现有一厚层管样牙本质基质形成并衬有一层高柱状的极化细胞；未用TGF-β抗体中和的脱矿或未脱矿牙本质盖髓可以诱异管状牙本质形成并衬有极化的成牙本质细胞样的细胞；而用TGF-β抗体中和的脱矿牙本质盖髓则完全丧失了诱导活性，未脱矿牙本质只能形成纤维样牙本质，说明TGF-β 1对修复性牙本质的形成具有肯定的作用，牙本质基质诱导牙本质形成的能力很可能与含有TGF-β分子有关。

责任编辑：姚红祥