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提 要 目的 动态观察金地鼠颊癌变过程中α-SMA表达规律，并分析其表达和癌变间的相关性。方法 采用免疫组化技术检测金地鼠颊囊白斑癌变模型标本的α-SMA表达情况。结果 在轻、中、重度异常增生及癌各组间，α-SMA 表达减少有显著差异。随病变恶性程度增加，α-SMA的表达量减少。结论 α-SMA是一种良好的癌前病变辅助诊断指标。
关键词 金地鼠颊囊 α-SMA 癌前病变
材料和方法
材料
1. 实验动物：叙利亚品系金地鼠48只，由上海西普尔-BK公司提供。
2. 缓冲液配置（TRIS—HCL液，0.5M，pH7.6）：TRIS 61g,加入340ml Hcl,用800ml蒸馏水充分混匀后，再以蒸馏水定容至1000ml。
3. 免疫组化试剂：ABC试剂盒由DAKO公司提供。
方法
1. 实验动物分组
空白对照组：6只，常规饲养，左侧颊囊涂布0.9％NaCl液，分别于4～9周后处死，取左侧涂药区颊囊组织共6例。
模型组：42只，常规饲养，左侧颊囊涂布0.5％DMBA丙酮液，分别于4～9周后处死，取左侧涂药区颊囊组织共42例。
2. α-SMA检测
取下的组织块常规石蜡包埋，连续切片2份各约5μm厚，一份HE染色光镜下病理分级;一份60℃烘箱内放置40分钟后，恒温箱中保持24～48小时，准备作α-SMA免疫组化染色。
免疫组化染色步骤如下
2.1 脱蜡水化：恒温箱中取出切片，二甲苯中15分钟×3次→100％、95％、90％、80％、70％梯度乙醇液中，每次均为5分钟→蒸馏水冲洗干净。
2.2 微波处理修理丢失的抗原决定簇：脱蜡水化后切片置缓冲液洗5min×3次，再置0.1M柠檬酸缓冲液中微波处理10min。
2.3 α-SMA染色前处理：缓冲液洗涤5min×3次→0.2％ Triton-X 100中10min→清水冲洗5min×3次→0.3％H2O2中浸泡5min→5％牛奶中孵育30min。
2.4 α-SMA染色：常规ABC法。
3. 光镜下病理分级：标准参照1978年WHO口腔癌前病变协作中心诊断标准。
观察与计数
每侧高倍镜下计算相邻3个视野内α-SMA连续性染色血管密度值（连续性染色血管数／视野内血管总数×100％），取平均值。
统计学处理
采用单因素方差分析，Duncan法组间两两比较和相关分析。
结 果
1. 光镜下病理分级结果
正常粘膜6例，炎症7例，轻、中和重度异常增生分别为12例、11例和9例，癌3例。
2. 免疫组化检测结果
涂DMBA不同周数组间α-SMA检测结果（表1）。
表1 涂DMBA不同周数组间α-SMA连续性染色血管密度（％）
| 涂DMBA周数 |
例数 |
 |
| 第4周 |
7 |
54.02±30.61 |
| 第5周 |
7 |
36.79±24.26 |
| 第6周 |
7 |
35.95±22.89 |
| 第7周 |
7 |
27.52±18.32 |
| 第8周 |
7 |
19.28±17.50 |
| 第9周 |
7 |
15.33±14.58 |
图1示：随涂DMBA周数的增加，α-SMA表达量呈渐进性下降。
图1 涂DMBA不同周数组间α-SMA连续性染色血管密度（％）
从表2可见，正常颊囊粘膜与炎症组间粘膜下α-SMA连续性染色血管密度无显著性差别（P＞0.05）；鳞癌组较重度异常增生组粘膜下α-SMA连续性染色血管密度下降有显著性差别（P＜0.05）；其余各组间粘膜下α-SMA连续性染色血管密度有高度显著性差别（P＞0.01）。
表2 不同病理变化组间颊囊粘膜下α-SMA连续性染色血管密度（％）
| 病理分级 |
例数 |
x±s |
α=0.05 |
α=0.01 |
| 正常粘膜 |
6 |
100.00±0.00 |
A |
A |
| 炎 症 |
7 |
100.00±0.00 |
A |
A |
| 轻度异常增生 |
12 |
56.35±8.45 |
B |
B |
| 中度异常增生 |
11 |
20.86±5.50 |
C |
C |
| 重度异常增生 |
9 |
9.22±2.02 |
D |
D |
| 癌 |
3 |
2.64±0.35 |
E |
D |
变量转换后，采用单因素方差分析，Duncan法作组间两两比较，字母相同为无显著差别。
 
图2 正常粘膜血管α-SMA染色（140倍）
图3 异常增生粘膜血管α-SMA染色（140倍）
3. 相关分析结果
α-SMA连续性染色血管密度与病理分级呈高度负相关，即随病变恶性程度增高，α-SMA表达量下降（P＜0.01）。
责任编辑：姚红祥 |