罗汉果浸出液对变链菌致龋作用的实验室研究

作者:穆静  文章来源:中华口腔医学杂志 

2008-6-20 14:28:41         【博客】 【论坛】 【投稿】 【打印】 【关闭

  【摘要】 目的 为探讨含蔗糖外甜味素的天然植物果——罗汉果对变形链球菌(简称变链菌)致龋作用的影响。方法 用实验室比浊法观察罗汉果浸出液对变链菌的生长、玻棒粘附和产酸的影响,并设蔗糖、甜菊糖、果糖和葡萄糖实验组与其比较。结果 显示变链菌在罗汉果试验液中的生长及酵解明显低于其它实验组,包括甜菊糖组(P<0.01);变链菌对玻棒的粘附在罗汉果组中最低。结论 罗汉果甜度高、粘度小,其抑制变链菌致龋作用优于甜菊糖,提示了它可能作为无致龋性甜味剂的应用前景。
  【关键词】 罗汉果  链球菌,变异  防龋性

  现代研究表明,蔗糖的摄入与龋齿的形成密切相关,为此国内外学者致力寻找有甜味而无致龋性或低致龋性的糖代用品。如帕拉金糖、甜菊糖等都已被证明能减少龋齿的发生[1]。
  罗汉果是一种天然无毒、含蔗糖外甜味素的植物果。有研究表明其甜度约为蔗糖的300倍,可作为糖尿病患者和肥胖等不宜吃糖者的替代品[2];华南地区民间有冲泡罗汉果作为日常饮料的习惯,而罗汉果对变形链球菌(简称变链菌)的生长影响尚未见报道。为了探讨其对变链菌致龋作用的影响,本实验就变链菌在罗汉果浸出液中的生长、玻棒粘附和产酸情况作了相关研究,并与蔗糖、葡萄糖、果糖和甜菊糖进行了比较。

材料和方法

  1.实验材料:实验用血清C型变链菌菌株,由华西医科大学口腔医学院提供。取一支冻干菌株接种于TS培养基中增菌,37℃ 48小时厌氧培养、离心、洗涤,用UV-754分光光度计调整菌液OD=1.0,此为实验用菌液。
  罗汉果由珠海市药材公司提供,取优质干果50g剪成碎块,加煮沸蒸馏水至500ml,60℃恒温浸提过夜,定量滤纸过滤。该滤液浓度为10%。
  2.实验方法:在基础培养液(成分:2%Trypticase, 0.2% NaCl, 0.3% K2HPO4, 0.2%KH2PO4,0.1%K2CO2,0.012%MgSO4,0.0015% MnSO4,适量酵母浸汁和半胱氨酸)中分别加入5%的罗汉果、甜菊糖、蔗糖、葡萄糖和果糖;另在5%的罗汉果培养基中再加入5%的蔗糖,设未加糖的基础培养液为阴性对照组,共7组[3]。
  将上述7组试验液15ml分装于试管内,各加菌液1ml,37℃厌氧培养48小时,离心(2 000r/min)20分钟,测出上清液pH值。流动生理盐水洗涤2次,分光光度计比浊,测出变链菌的生长量。
  取1ml菌液接种于装有20ml各试验液的试管中,插入直径为0.5cm的玻棒,厌氧培养48小时,取出玻棒,生理盐水冲洗10秒钟。用0.1mol/L NaOH溶液将玻棒上粘附的菌细胞洗脱下来,离心、洗涤、比浊,用分光光度计测出变链菌对玻棒的粘附能力。以上实验相同方法重复6次。

结果

  1.各实验组对变链菌的生长影响,见表1。

表1 各实验组变链菌生长的方差统计
 
实验组 OD值(x-.gif (47 bytes)±s) P值
与对照
组比较
与蔗糖
组比较
与罗汉果
组比较
蔗糖 2.71±0.08 <0.01   <0.01
葡萄糖 2.87±0.25 <0.01 >0.5 <0.01
罗汉果+蔗糖 2.66±0.04 <0.01 >0.5 <0.01
果糖 2.60±0.17 <0.01 >0.5 <0.01
甜菊糖 1.75±0.08 <0.01 <0.01 <0.01
罗汉果 0.30±0.14 >0.5 <0.01
阴性对照 0.17±0.02
  表1所示变链菌在罗汉果和甜菊糖试验液中的生长明显低于蔗糖、葡萄糖和果糖(P<0.01);在罗汉果中生长又明显低于甜菊糖(P<0.01),与阴性对照组相似(P>0.5)。说明罗汉果、甜菊糖不利于变链菌的生长,罗汉果优于甜菊糖。
  在罗汉果试验液中加入蔗糖后变链菌生长量与蔗糖组相似(P>0.5),与罗汉果组差异有显著性(P<0.01),说明罗汉果与蔗糖配伍后对变链菌生长无抑制作用。
  2.各实验组中变链菌对玻棒的粘附,见表2。

表2 各实验组变链菌对玻棒粘附的方差统计

实验组 OD值(x-.gif (47 bytes)±s) P值
与对照
组比较
与蔗糖
组比较
与罗汉果
组比较
蔗糖 1.943±0.278 <0.01   <0.01
罗汉果+蔗糖 1.860±0.117 <0.01 >0.5 <0.01
果糖 0.987±0.022 <0.01 <0.01 <0.01
甜菊糖 0.883±0.052 <0.01 <0.01 >0.5
葡萄糖 0.882±0.096 <0.01 <0.01 >0.5
罗汉果 0.678±0.015 <0.01 <0.01
阴性对照 0.093±0.011

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责任编辑:姚红祥  

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