图1　Tca8113细胞经CDDP(3μg/ml)作用3d后,光镜见凋亡细胞体积小，染色质浓染、呈碎块状(箭头示) (Giemsa染色，×400)
Fig.1　The morphological change under microscope treated with CDDP (3μg/ml) for 3 days in Tca8113 cells. Shrinking of apoptotic cells, fragmentation of the nuclei were noted(arrow)(Giemsa stain,×400)

图2　Tca8113细胞经CDDP(3μg/ml)处理3d后,荧光染色镜下见凋亡细胞核固缩，呈橙红色(箭头示)，活细胞为绿色(×100)
Fig.2　The changes of CDDP-treated (3μg/ml) Tca8113 cells by DNA fluorescence staining, Orangered color: apoptotic cells (arrow); Green color: alive cells

图3　Tca8113细胞经CDDP(3μg/ml)处理3d后,电镜下可见凋亡细胞固缩，染色质浓聚、成块状位于核膜下(TEM×3k)
Fig.3　The TEM morphological changes of Tca8113 cells treated with 3μg/ml CDDP for 3 days. Shrinking of cells, chromatin condensation, fragmentation of the nuclei, and aggregated into dense masses in the nuclear periphery were noted

表1　CDDP作用Tca8113细胞不同时间的凋亡细胞变化
Tab.1　Effect of CDDP on apoptosis of Tca8113 cells in different exposed periods

	时间
	0d	2d	4d	6d
凋亡细胞比例(%)	2.5	9.5	18.5	40.5

表2　对照组Tca8113细胞不同时间的周期时相变化 Tab.2　The cell cyclic changes of non-treated Tca8113 cells in different times

表3　CDDP作用Tca8113细胞不同时间的周期时相变化 Tab.3　The cell cyclic changes of CDDP-treated Tca8113 cells in different times

3　讨论

　　细胞凋亡是由基因控制的细胞自我消亡过程，它与细胞分裂、增殖一样，对组织的生长发育起着同等重要的调节作用，在维持机体平衡状态方面有积极的生物学意义［3］。近年来的大量研究表明，大部分化疗药物导致细胞死亡的机理是细胞凋亡而不是细胞坏死［4］。与引发肿瘤细胞坏死相比，诱导肿瘤细胞凋亡的化疗药物要求剂量较小，作用时间较短，产生的不良反应也较轻。因此有必要对肿瘤细胞凋亡的本质特点及发生机理进行研究，为进一步设计有效的化疗方案提供依据。
　　典型的凋亡细胞电镜下表现为细胞固缩，染色质致密、边缘化；核凝聚固缩，染色体断裂形成核碎块，胞质气泡产生，凋亡小体形成 ［5］。本实验用CDDP作用Tca8113细胞3d后，可见典型的细胞凋亡形态变化，证实CDDP能诱导Tca8113细胞产生凋亡。随CDDP浓度升高，凋亡细胞数增加，提示CDDP对Tca8113细胞凋亡诱导作用有剂量依赖关系。
　　DNA荧光染色检测细胞凋亡操作简单，可对凋亡细胞定性、定量检测［2］。本实验用浓度3μg/ml CDDP作用后，每隔2d检测显示，凋亡细胞随作用时间延长而增多，证实CDDP对Tca8113细胞凋亡作用有时间依赖性。因此从诱导细胞凋亡角度考虑，对Tca8113细胞小剂量持续给药可提高疗效。
　　利用FCM技术分析CDDP对Tca8113细胞周期影响，显示CDDP作用3d后Tca8113细胞S期的分布明显增加。CDDP细胞周期阻断效应是导致凋亡细胞增多的重要原因，这种阻断作用的增强可产生细胞同步化效应，使肿瘤细胞分布在S期，再加用作用于S期细胞周期特异性药物，可望起到协同抗瘤作用。国外已有报道，化疗药物CDDP+ADM、CDDP+5-Fu可起到协同抗瘤作用，提高化疗效果［6］。

责任编辑：姚红祥