〔摘要〕　目的：研究神经端侧缝合术后靶肌肉的组织学变化和运动终板再生。方法：10只SD雄性大鼠分成A、B两组。A组：切断右侧腓总神经，将远侧断端以端侧缝合术式吻合到同侧胫神经外膜开窗部.。B组：切断右侧腓总神经，并将两断端分离。两组左侧后肢作为正常对照。术后2月作行为学检查。胫前肌取材行H E染色，胆碱酯酶染色和突触素免疫组化染色。结果：神经端侧缝合术后受体神经的靶肌肉功能得以恢复。组织学形态接近正常，神经肌肉接头可有效重建。结论：①神经端侧缝合术是一种有效的神经修复方法；②突触素组化染色用于研究运动终板的重建优于以往的胆碱酯酶染色法。
关键词　外科吻合术；神经肌肉；免疫组织化学

　　神经端侧缝合术是在不切断供体神经纤维的前提下利用供体神经侧枝性生芽，达到修复神经损伤目的〔1〕。对该方法能否诱导神经再生、并使靶器官功能得以恢复、以及恢复的程度尚有分歧〔2,3〕。目前，研究多限于吻合口部的轴突再生情况，对于术后靶器官变化的研究尚未见报道。我们设计了该实验，以期通过对靶器官组织变化的研究，对靶器官功能恢复情况和该方法的可行性作初步探讨。

1　材料和方法
1.1　实验动物
　　健康雄性SD大鼠10只（第四军医大学实验动物中心提供），体重200 g左右，简单数字法随机分成2组，每组5只。A组右侧后肢为实验侧，B组右侧后肢为失神经对照侧。左侧为正常对照。
1.2　手术方法
　　严格无菌操作。A组于右侧股正中切开，暴露神经，切断腓总神经，结扎中枢侧断端。在胫神经外侧纵行切开外膜1 mm，修成圆形小窗，以11-0无创缝线将腓总神经远侧断端与胫神经开窗部做外膜缝合。B组将右侧腓总神经切断，结扎断端。两组左侧不作处理。术后动物不作特殊功能训练。
1.3　行为学观察
　　术后2月见失神经组右侧足趾屈曲，不能伸展，行走靠足外侧支撑平衡；端侧吻合术组术侧足趾均能主动伸展，行走时展趾距更大。驱赶行走30 min后，表现出展趾距变小，足蜷缩等类似腓总神经损伤表现。
1.4　取材及切片
　　切取双侧胫前肌，在最大横径部沿肌纤维方向作冰冻连续切片15张，厚25 μm。5片用于乙酰胆碱脂酶(AChE)染色；5片用于AChE加Gros染色；5片用于突触素（SYP）免疫组化染色。切片入丙酮固定，干燥后冷冻保存，余留肌组织作HE染色。
1.5　胆碱酯酶组化染色
　　切片滴加胆碱酯酶孵育液，4 ℃过夜，水洗，封片。行Gros银染者水洗后，200 g/L硝酸银避光浸染45 min，体积分数为20％福尔马林洗，水洗，加氨银液显色，用200 g/L 20％氨水终止反应，水洗后，滴加2 g/L氯化金，入500 g/L硫代硫酸钠。封片。
1.6　免疫组织化学染色
　　切片浸入体积分数为0.3％ H2O2 30 min，滴加ABB封闭剂，水洗后加1∶20工作血清（DaCo公司）室温30 min，加一抗1∶50兔抗SYP多抗（DaCo公司），4 ℃过夜；0.01 mol/L PBS洗3次，滴加1∶100羊抗兔抗体(DaCo公司)37 ℃ 30 min, PBS洗3次，加SABC复合物（武汉博士德公司）30 min，PBS洗3次，DAB显色。脱水透明，封片。以PBS代替一抗作为阴性对照。

2　结　果
2.1　HE染色　失神经肌肌细胞广泛萎缩，呈多样性，个别肿胀崩解，核居中，肌纤维间及肌束间纤维组织增多。端侧缝合术组肌纤维形态大小接近正常，在小范围有轻度萎缩，肌束内外有少量纤维增生，但明显区别于失神经肌肉的表现。
2.2　AChE染色　镜下正常胫前肌终板带窄，由大小一致的棕黑色盘状着色区排列而成。着色区位于肌纤维表面(图1 A)。Gros法复染后可见部分终板与神经末稍连接。失神经肌中，终板带变宽，脚板直径缩小50%左右，着色浅，分布弥散，位于萎缩肌纤维表面，脚板数无明显改变(图1 B)。Gros法复染后未见神经末稍。神经吻合组终板带呈窄带。脚板数无改变，部分脚板形态、着色恢复正常，部分仍呈萎缩。脚板排列由弥散状向线状恢复(图1 C)。Gros法复染后可见少量神经末稍与之相接。

责任编辑：姚红祥