【摘要】目的：了解类金刚石碳－钛复合材料对动物免疫系统的影响。方法：利用化学气相沉积法将类金钢石碳镀于金属钛表面（厚约1μm)，制成类金钢石碳—钛复合体（Diamond－Like－CarbonTitanium,DLC－Ti)，并以纯钛、医用不锈钢、纯铜作对照，分别植入小鼠体内，手术后1、2、3、4和6周检测外周血T淋巴细胞亚群CD4、CD8阳性细胞率及CD4与CD8比值(CD4/CD8)的变化情况。比较受试材料对机体免疫系统的影响。结果：DLC－Ti对免疫系统只具有短时间的抑制作用，在第2周和第3周时对CD4和CD8分别有明显的抑制作用，实验后期则无明显影响，而其它三种材料对小鼠T淋巴细胞亚群始终存在明显的抑制作用。结论：类金刚石碳－钛材料有较好的生物相容性，是有潜力的临床复合种植材料。
纯钛做为种植材料虽然已广泛应用于临床，但纯钛具有慢性腐蚀，高弹性模量，应力传递不均，骨适应性差的缺点[1,2],而现在国内外较多采用涂羟基磷灰石的钛种植体。虽然骨整合起动早，但临床及有关资料都证实羟基磷灰石涂层时有剥脱现象。本实验选用的DLC－Ti复合体是利用等离子化学气相沉积法将DLC镀于钛表面形成的复合体。该DLC涂层经X线结构分析证明是非晶碳膜，电子探针分析为表面纯碳，并无钛及其它杂质出现。电阻率约为10－8Ω/cm2,显微硬度约2000kg/mm2,膜与钛基体的粘结强度用直接拉伸法测定不低于23MPa,在3％NaCl溶液中浸泡6年至今膜未出现剥落，电化学腐蚀试验结果表明，涂覆DLC的钛试样具有很好的耐腐蚀性[3]。体外细胞培养实验证实DLC－Ti具有良好的生物相容性[4],骨内种植的酶组化研究表明植入DLC－Ti后成骨活动启动早，植入后2个月基本达到骨整合[5]。本实验将其与纯钛、医用不锈钢相比较，以种植术后机体T淋巴细胞亚群为指标，比较受试材料对小鼠外周血免疫状况的影响。为临床优选更好的种植材料提供免疫学依据。
1 材料和方法
1.1 植入材料
选用4种材料：DLC－Ti、纯钛、8－18镍铬不锈钢合金、纯铜（作阳性对照）。上述材料制备成5mm×2mm×1mm长方体，于实验前酒精梯度脱酯，高压灭菌后放入无菌生理盐水中备用。
1.2 动物实验方法
选用健康雄性BALB/C鼠，共175只，体重182克，随机分作5组，每组35只，分别为A—对照组；B—DLC－Ti组；C—纯钛组；D—医用不锈钢组；E—纯铜组。在每个实验组的小鼠左侧大腿内侧肌肉内种植一种材料，对照组只进行切开缝合，不放入种植材料。分别于术后1、2、3、4和6周每组各取7只小鼠眼眶静脉取血，作T淋巴细胞亚群检测。
1.3 外周血T淋巴细胞亚群的检测方法
1.3.1将肝素抗凝血置于白细胞分层液上，分离出单个核细胞，经Hank\'s液洗涤及Tris－NH4Cl破坏红细胞，调整细胞浓度为1×107/ml。
1.3.2往Ependorff管中加入细胞悬液100μl,分别加入抗CD4、CD8单克隆抗体100μl（10倍稀释液），4℃放置40分钟，取出后离心洗涤，分别加入FITC标记的免抗大鼠IgG多克隆抗体100μl（10倍稀释液），置4℃40分钟。
1.3.3取出后再洗涤，滴片，双盲法于落射光荧光显微镜下计数荧光阳性细胞数，计算占全体淋巴细胞的百分率，共计数200个淋巴细胞。
选用4种材料：DLC－Ti、纯钛、8－18镍铬不锈钢合金、纯铜（作阳性对照）。上述材料制备成5mm×2mm×1mm长方体，于实验前酒精梯度脱酯，高压灭菌后放入无菌生理盐水中备用。
1.2 动物实验方法
选用健康雄性BALB/C鼠，共175只，体重182克，随机分作5组，每组35只，分别为A—对照组；B—DLC－Ti组；C—纯钛组；D—医用不锈钢组；E—纯铜组。在每个实验组的小鼠左侧大腿内侧肌肉内种植一种材料，对照组只进行切开缝合，不放入种植材料。分别于术后1、2、3、4和6周每组各取7只小鼠眼眶静脉取血，作T淋巴细胞亚群检测。
1.3 外周血T淋巴细胞亚群的检测方法
1.3.1将肝素抗凝血置于白细胞分层液上，分离出单个核细胞，经Hank\'s液洗涤及Tris－NH4Cl破坏红细胞，调整细胞浓度为1×107/ml。
1.3.2往Ependorff管中加入细胞悬液100μl,分别加入抗CD4、CD8单克隆抗体100μl（10倍稀释液），4℃放置40分钟，取出后离心洗涤，分别加入FITC标记的免抗大鼠IgG多克隆抗体100μl（10倍稀释液），置4℃40分钟。
1.3.3取出后再洗涤，滴片，双盲法于落射光荧光显微镜下计数荧光阳性细胞数，计算占全体淋巴细胞的百分率，共计数200个淋巴细胞。
2 实验结果
2.1 术后CD4阳性细胞率的变化结果
种植术后CD4阳性细胞率变化情况见表1。
种植术后CD4阳性细胞率变化情况见表1。
表1 种植术后CD4（％）变化（
±s）n=7
±s）n=7| 时间（周） | A组B组C组D组E组 | B组 | C组 | D组 | E组 |
| 1 | 47.73±3.75 | 50.45±5.20 | 38.52±4.04△△** | 40.55±4.65△△** | 49.58±5.54 |
| 2 | 44.25±2.43 | 42.88±3.07 | 36.21±3.18△△** | 34.21±5.55△△** | 36.63±4.10△△** |
| 3 | 49.33±4.93 | 41.27±5.67△△ | 37.97±2.31△△ | 45.60±6.49 | 44.22±3.17△ |
| 4 | 48.31±3.37 | 44.33±3.20 | 44.0±11.19 | 44.66±3.38 | 42.63±4.46△ |
| 6 | 60.26±8.07 | 57.37±4.66 | 52.32±5.81 | 56.46±6.04 | 8.55±3.05△△** |
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