摘要 目的:研究涎腺肿瘤的发生和发展规律，建立涎腺肿瘤动物模型。方法:采用化学致癌物3-甲基胆蒽对40只SD大鼠颌下腺腺体内进行直接注射的方法，观察诱发产生颌下腺肿瘤情况。结果:共诱发肿瘤32例，其中鳞癌4例，平滑肌肉瘤28例。并对所诱发的两种肿瘤的组织学、免疫组织化学和超微结构进行了观察，探讨了3-甲基胆蒽对大鼠颌下腺的致癌作用及所诱发肿瘤的组织起源。结论:3-甲基胆蒽诱发大鼠颌下腺肿瘤能成功地建立颌下腺肿瘤的动物模型，并以平滑肌肉瘤多见。
关键词 3-甲基胆蒽 大鼠 颌下腺肿瘤 化学诱癌 动物模型
涎腺肿瘤（salivary gland tumor， SGT）是口腔颌面部较常见的一类肿瘤，病理形态复杂，分类不甚统一。为了研究SGT的发生、发展规律，人们用不同的方法（化学、病毒、射线或放射性同位素）诱发实验动物的涎腺肿瘤，建立动物模型［1～4］，并在此基础上对SGT的发生机制及组织起源等进行深入的研究［5～7］。本研究采用3-甲基胆蒽（3-methyl cholanthrene，MCA）橄榄油液，在全麻下手术暴露颌下腺后，直接注入腺体内诱发肿瘤，并对诱发的两种肿瘤进行了光镜、电镜观察以及免疫组织化学研究。
1 材料和方法
1．1 大白鼠颌下腺肿瘤模型的建立
材料 SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠由河南医科大学动物中心提供，3月龄左右，雄性体重300～350 g，雌性体重250～300 g，各23只，按性别分为两组。3-甲基胆蒽（ MCA）由瑞士Fluka公司生产，用商品橄榄油将其溶解。
实验方法 用2％戊巴比妥钠溶液按45 mg/kg大鼠腹腔内注射麻醉。剪毛备皮。在大鼠颈部采用横切口，切开皮肤2.0 cm，暴露双侧颌下腺腺体，左侧颌下腺内注入0.2 ml（ 10mg／ml）MCA，右侧腺体内注入0.2 ml纯橄榄油作为自身对照。术后按雌雄分笼饲养，给予标准实验动物饲料。每过1月，随机处死雌雄大鼠各2只，取其标本，用缓冲福尔马林液（4g／L）固定标记，6个月后全部处死，将所有标本（包括淋巴结、肝、肺）常规病理切片，HE染色后观察分类。
1．2 电镜样品制备
按常规制备，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色后，用日立H-600透射电镜作超微结构观察。
1．3 免疫组织化学染色
试剂 兔抗人试剂盒、DAB、兔抗人角蛋白（keratin）多克隆抗体（A575），鼠抗人肌动蛋白(actin）单克隆抗体（ M851），以上试剂均为DAKO产品。
方法 采用标记链菌素-生物素(labelled streptavidin biotin, LSAB）法，按LSAB试剂盒标明程序略作改进。
免疫组化染色结果判定 阳性结果为棕黄色，阴性结果不显色。根据染色强度分为：深棕色为强阳性（+++）；浅棕色为弱阳性（+）：介于二者之间为阳性（++）。
2 结 果
2．1 诱发颌下腺肿瘤
由于手术及麻醉原因，6只大鼠于手术后48小时内死亡，作为无效动物处理，其余40只大鼠顺利完成实验。 按计划每过1个月随机处死雌雄大鼠各2只，6个月时全部处死。前2个月处死的8只大鼠未见肿瘤，从术后3个月证实有肿瘤生长，6个月时发瘤率已达100％，计32例。对照侧无一例出现肿瘤。 肿瘤出现时间及生长速度,最早看到或触及肿块是在用药两个月以后，满3个月处死时经病理证实为肿瘤，其中鳞状细胞癌生长缓慢，平滑肌肉瘤生长迅速。
2．2 诱发肿瘤的病理形态学观察
2.2.1 大体观察 鳞状细胞癌体积普遍较小，其直径从1.0～2.5 cm不等，无包膜，类圆形，不规则结节状，质硬韧，边界不清，与周围组织有粘连；切面呈大小不等的囊腔，灰白色，可见有灰白色坏死物。平滑肌肉瘤体积普遍较大，其直径为 1.0～5.5 cm不等，类圆形，有假包膜，表面呈不规则结节状，质中等，边界较清,剖面多为灰红色，鱼肉状，有时可见出血坏死及囊性变。
2.2.2 HE染色切片观察 鳞状细胞癌:癌组织常出现囊腔，腔内被覆鳞状上皮，并有大量角化物质，癌细胞向囊壁周围浸润生长；癌细胞排列成大小不等、不规则的片块或条索状，癌巢之间有结缔组织间质，有时可见炎细胞浸润；近囊腔部位可见大量角化珠，远离囊腔部位的角化珠明显减少，而且癌细胞分化较差，异型性明显，很少有细胞间桥。
