摘要 目的:研究腮腺腺淋巴瘤(Warthin\'s瘤)和EB病毒感染之间的关系。方法:应用聚合酶链反应技术检测75例Warthin\'s瘤,20例正常腮腺组织的EB病毒DNA整合情况。结果:62例单发Warthin\'s瘤中19例检出EB病毒DNA整合,13例双侧或单侧多发Warthin\'s瘤中9例检测出EB病毒DNA整合。20例正常腮腺组织中3例EB病毒DNA整合阳性。结论:EB病毒感染与双侧或单侧多发Warthin\'s瘤有关。
关键词 EB病毒 Warthin\'s瘤 聚合酶链反应
EB病毒(EBV)是与人类肿瘤关系密切的病毒之一,儿童伯基特淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌等肿瘤均与该病毒的感染有关。它一经感染即可潜伏于体内,并可高频率地在口腔唾液中检出,有关该病毒与腮腺肿瘤之间的关系报道甚少。笔者应用高敏感的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对腮腺腺淋巴瘤中EB病毒整合进行研究,现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1 标本来源
中国医科大学附属第一临床学院口腔外科1988年至1998年收治的Warthin\'s瘤患者75例,其中单发62例,双侧或单侧多发13例,年龄46～72岁。正常腺体20例,均经病理诊断证实。
1.2 药品来源
EB病毒PCR检测试剂盒购自华美生物工程公司。
1.3 标本处理
石蜡包埋组织,切取10 μm厚切片5张,放入1.5 ml Eppendorf管内,加入二甲苯脱蜡3次,无水乙醇洗涤沉淀3次,真空干燥,加5 μl样品裂解液悬浮,55℃保温30分(每10分轻轻振荡消化管),100℃煮沸10分,14000 r/min离心5分,取上清2 μl做PCR反应模板。
1.4 PCR扩增
取出PCR反应混合物,充分融化后混匀,离心数秒,取25 μl加入PCR反应管中,滴加两滴液体石蜡,加入2 μl已处理标本,离心数秒即可在PCR仪上循环。阳性对照直接取2 μl进行PCR扩增。
1.5 结果判断
将50×TAE电泳缓冲液20 ml加双蒸水稀释至1000 ml(1×TAE)待用。取50 ml 1×TAE缓冲液于三角瓶中,加入1支琼脂糖加热使之溶解至清亮状。凉至50℃左右倒入电泳平板,电泳槽中倒入1×TAE缓冲液,取PCR终产物10～15 μl点样,80～100 V电泳10～20分后置于302 nm紫外透射仪上观测。样品出现和阳性对照在同一水平位置上的红橙色荧光带即为阳性,否则为阴性。
1.6 统计方法
采用χ2检验进行数据统计学分析。
2 结 果
应用PCR检测62例单发Warthin\'s瘤,19例EB病毒DNA整合阳性,阳性率30.65%,与正常腮腺组相比,P>0.05;13例双发或单侧多发Warthin\'s瘤,9例EBV-DNA整合阳性,阳性率为69.23%。20例正常腮腺,3例EBV-DNA整合阳性,阳性率为15%,与正常腮腺组相比,P<0.01(表1)。
3 讨 论
EB病毒在全世界侵袭范围广,约90%以上成年人均受到过该病毒的感染,其属于r-疱疹病毒,病毒基因组为双链线性DNA,相对分子量为101×10-6±3×106。完整的病毒颗粒是由类核、壳微粒、衣膜和包膜4个部分组成［1］。自从1963年Epstin和Barr首次发现EBV感染与儿童伯基特淋巴瘤有关以来,人们又相继发现在霍奇金病［2］、鼻咽癌［3］、喉癌［4］、乳腺癌［5］、胃癌［6］等上皮性肿瘤中有该病毒整合。最近应用PCR及原位杂交技术在口腔鳞癌及唾液腺肿瘤组织中也证实有EB病毒存在［7］。
有关Warthin\'s瘤的病因仍不十分清楚,有研究报道与吸烟有关［8］。其双侧发生及单侧多发的特点,仍未被研究解释清楚。笔者应用高度敏感的PCR技术对75例腮腺Warthin\'s瘤和20例正常腮腺组织中EB病毒整合情况进行了研究。实验结果显示69.23%的双侧或单侧多发Warthin\'s瘤组织中有EBV整合,30.65%的单发Warthin\'s瘤中有EBV整合,而正常腮腺组织中EBV整合阳性率仅为15%。故笔者认为EBV感染与双侧发生或单侧多发的Warthin\'s瘤有较强的联系。
作者单位:中国医科大学附属第一临床学院口腔外科 110001
参考文献
1 Jone MD, Griffin EB. Clustered repeat sequences in the genome of Epstein-Barr virus. Nucleic Acids Res, 1983, 11(3):3919～3927
