现已知抑癌基因p16的编码产物P16蛋白可通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4的活化而使细胞停滞在G1期,从而抑制细胞的增殖［1,2］。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是DNA聚合酶σ的辅助蛋白,对细胞增殖的启动有重要意义［3］。目前PCNA常作为反映细胞增殖水平的可靠指标。本文研究口腔粘膜鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)及白斑(leukoplakia, LK)P16蛋白及PCNA的表达,以了解P16蛋白表达对口腔粘膜增殖水平的影响及其与口腔粘膜SCC发生、发展过程的关系。
1 材料和方法
所有标本均选自河南医科大学第一附属医院病理科1990～1997年存档的蜡块。选取32例口腔粘膜白斑,其中单纯增生性白斑8例,不典型增生性白斑24例;口腔粘膜SCC43例,其中Ⅰ级13例,Ⅱ级19例,Ⅲ级11例。以上标本均经两位病理科医师双盲法阅片并诊断一致。6例正常口腔粘膜作为实验对照。
P16蛋白单抗(Santa Cruz公司)、PCNA单抗(DAKO公司)、免疫组化染色用SP试剂盒,均购自北京中山生物技术公司。免疫组化染色步骤按SP试剂盒说明。每批染色均设阳性对照及阴性对照。
PCNA染色以细胞核内出现棕黄色颗粒状或弥漫性着色为阳性细胞,细胞浆不着色。P16蛋白阳性细胞细胞浆和细胞核均可染成深浅不等的棕黄色,出现其一即为阳性细胞。对PCNA染色,同时计算PCNA阳性指数,即阳性细胞占总计数细胞的百分率。
2 结 果
2.1 P16蛋白免疫组化染色结果
正常粘膜组均为P16蛋白阳性表达,阳性细胞分布于上皮各层次,胞核和胞浆均为阳性。单纯增生性白斑与正常对照组相似,但染色强度明显增加,角化层以下各层呈现一均匀的棕黄色带状,阴性细胞少见。不典型增生性白斑胞浆表达与单纯增生性白斑相似,但胞核表达出现异质性,表现为有的胞核染色较深,有的胞核着色较浅或为阴性。
37.21%(16/43)的口腔粘膜SCC表现为P16蛋白染色阴性,即胞浆和胞核均为阴性。阴性标本见于SCCⅡ级及Ⅲ级,但SCCⅠ级均为阳性表达。口腔SCC P16蛋白染色阳性切片异质性更趋明显,可见较多的核阴性细胞散在分布。P16蛋白染色结果见表1。
表1 口腔粘膜鳞癌及白斑P16蛋白表达
| 组别 | 例数 | P16蛋白阳性 | % |
| 正常对照组 | 6 | 6 | 100.00 |
| 白斑 | 32 | 32 | 100.00 |
| 鳞状细胞癌 | 43 | 27 | 62.79 |
| Ⅰ级 | 13 | 13 | 100.00 |
| Ⅱ级 | 19 | 12 | 63.16* |
| Ⅲ级 | 11 | 2 | 18.18* |
2.2 PCNA染色结果 表2 口腔粘膜鳞癌及白斑PCNA表达 |
| 组别 | 例数 | 基底上层 模式(%) | PCNA阳性指数 ±s(%) |
| 正常对照组 | 6 | 0(0.00) | 8.02±1.23b |
| 白斑 | 32 | 22(68.75) | 22.49±11.73b |
| 单纯增生 | 8 | 2(25.00)a | 11.71±2.23c |
| 不典型增生 | 24 | 20(83.33)a | 26.07±11.42c |
| 鳞状细胞癌 | 43 | 40.54±15.97b | |
| Ⅰ | 13 | 25.63±6.54d | |
| Ⅱ | 19 | 35.85±10.47d | |
| Ⅲ | 11 | 55.51±14.22d |
a:两者之间P<0.01;b:两两之间P<0.01;c:P<0.01;d:两者之间P<0.01;
