【摘要】 目的 建立一种与临床更相关的人舌鳞癌动物模型。方法 将人舌鳞癌Tca 8113细胞行裸鼠原位移植并连续传代。对每代移植瘤和裸鼠口底、颌下组织、肉眼可见的颈部淋巴结以及下颌骨进行病理学观察。对第5代移植瘤进行超微结构观察。第4代移植瘤及裸鼠骨髓细胞进行染色体检查。结果 移植成功率为90%，液氮冻存复苏移植成功率为100%。移植瘤符合鳞状细胞癌特征，染色体检查表明其属人类染色体。4只裸鼠发生了口底和颌下浸润。1只转移至颌下淋巴结。癌细胞浸润肌肉，神经和周围血管。结论 本模型较客观地反映了人舌鳞癌的生物学行为，为舌癌的生物学及实验治疗的研究提供了较理想的动物模型。
【关键词】 舌肿瘤 动物，实验 癌，鳞状细胞
人舌癌裸鼠移植模型的报道仍限于皮下［1］。我们自1994年11月开始，将人舌鳞癌Tca8113细胞裸鼠舌原位移植和鼠间传代，旨在建立一种与临床更接近的人舌癌动物模型。
材料与方法
1.实验动物：BALB/c-nu/nu裸鼠，3～5周龄，雌雄兼用，体重15～20g(同济医科大学和湖北省医学科学院实验动物中心提供)。 全部裸鼠严格饲养在无特异性病原菌(specific pathogen free，SPF)、恒温(20～26℃)、恒湿(45%～50%)的空气洁净的层流架内；笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸汽灭菌。
2.人舌鳞癌Tca8113细胞(由上海第二医科大学赠送)。
3.原位移植：
(1)原位接种：对数增殖期贴壁生长的Tca8113细胞消化后，RPMI-1640培养液冲洗、吹打、离心。调整细胞浓度达4×1010个/L。按35mg/kg体重腹腔注射1.25%戊巴比妥钠麻醉，每只裸鼠舌缘中份粘膜下注入细胞悬液0.05ml。共接种5只。
(2)原位移植传代：细胞接种4周后，无菌切除移植瘤，并剪成1mm3～2mm3瘤块。待移植裸鼠麻醉后，剖开舌缘或舌腹粘膜，植入一瘤块。每代用鼠3～5只，移植瘤冻存与复苏、复苏后再移植［2］。
4.观察项目：
(1)移植成功率。(2)生长潜伏期。(3)每周2次测量移植瘤最长和最短半径A、B，按公式V=3/4πAB2计算瘤体体积，绘制肿瘤生长曲线。(4)解剖和组织病理学检查：全部处死或自然死亡荷瘤裸鼠均将移植瘤、口底、颌下组织、肉眼可见颈淋巴结、下颌骨(硝酸脱钙)、肝、肾、肺、脾等脏器解剖，经10%福尔马林固定，石蜡切片，HE染色，光镜观察。(5)电镜标本经常规戊二醛固定，超薄切片，日立H-600透射电镜观察。(6)染色体检查：取第4代移植瘤，采用短期培养法制备染色体标本。裸鼠骨髓细胞采用直接法制备染色体标本。均经Giemsa染色，光镜下观察。
结果
一、移植瘤生长特性
首代接种5只裸鼠均在7～10天成瘤。连续传代中，潜伏期渐缩短并稳定在10～15天，舌腹较舌缘移植瘤潜伏期短。第2、4、6代移植瘤生长曲线表明，生长高峰在15～30天，后期生长缓慢，符合Gompertz曲线的一般规律(图1)；肿瘤移植成功率为90%(27/30)，3例液氮冻存复苏全部成功。
图1 肿瘤生长曲线
二、组织病理学检查
1.解剖学观察：所有裸鼠的原位移植瘤超舌中线或占据舌前2/3，甚至充满口腔(图2)。移植瘤呈圆形或卵圆形，浸润性生长。瘤体表面光滑，质地硬，可见清晰的毛细血管，舌腹部移植瘤表面血管更为丰富。剖面呈均质状、乳白色，无包膜。部分瘤体中央液化。1～4代荷瘤裸鼠未见颌下、口底浸润。第5代1只带瘤生长74天，有口底浸润。第6代3只舌腹部移植的裸鼠，处死或死亡时有口底和颌下浸润，呈结节状、与周围组织粘连，约6mm×8mm。其中1只颌下淋巴结肿大。
图2 裸鼠舌原位移植瘤
2.光镜观察：1、3、5代移植瘤癌细胞排列紧密，呈巢状、片块或条索状，细胞呈多角形，异形性明显(图3)。核圆形、卵圆形、大小各异，核分裂象多见，并可见病理核分裂。染色质较粗、深染；核仁多个，核浆比例增大。有的区域可见瘤巨细胞，有的癌巢中央坏死；舌腹部移植瘤间质中可见丰富的新生血管，癌细胞浸润肌肉、神经和周围血管(图4)，并转移至颌下淋巴结。在移植传代中，分化程度未见明显变化。下颌骨未见侵袭破坏；肝、肾、肺等脏器未见转移。
